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吸光度测量解决方案
发布时间:2022-03-08   点击次数:415次

吸光度原理


吸光度:当入射光频率与物质分子的震动频率一致,或者入射光引起物质分子电子能级跃迁,都会产生光学吸收现象。溶液的浓度越高,穿过溶液的分子也会相应地被吸收越多。

其他:入射光透过物质没有发生任何反应或者变化,直接透过的光即为透射光。弹性散射的发生会引起光改变方向,但是不会引起波长或者能量的变化,反之则为非弹性散射。

 

 

吸光度与透过率关系

测试样品的透过率

透过率为透过光强度与原始光强的比值

如何根据您的应用选择不同的采样附件是至关重要的。这其中就包括您需要考虑您的样品是液体的还是气体的;样品的光学密度如何;是要原位测试,还是过程控制,或者是在一个反应腔室内。从应用出发进行附件筛选,海洋光学为您提供众多附件选择,从简单的实验室应用(比如比色皿和比色皿支架)到复杂的采样工具(比如透射探头和流动注射装置等等)。

 

如何确定未知样品的浓度

Lambert-Beer定律是一个线性方程

使用已知浓度的标准溶液测试其吸光度值

吸光度值和浓度之间可以建立一条线性关系的标准曲线

最后通过测量未知样品的吸光度值,从线性关系曲线中读取该样品的浓度值

图片3.png

吸光度测量

基于吸光度的简单实现与易使用,吸光度被广泛运用于液体和气体的光谱测量技术中。吸光度光谱可以对物质进行定量鉴别或者对物质进行指纹认证,亦或可以对溶液中的分子进行浓度定量分析。

 

吸光度测量可以以多种形式呈现。或针对液体或对气体,而且还可以将该应用集成到工业应用环境和客户所关注的测试中。样品不再仅仅使用比色皿作为载体,流动池、浸入式探头、微量进样器、气体存储皿、微量比色皿等等都可以作为采样装置。

 

使用模块化光谱仪,我们可以针对特定的吸光度测量来选择不同波长范围和分辨率的光谱仪,而且还能在实验室或者现场对整套光学测量装置进行快速、方便地更改。事实上,基于海洋光学强大的光谱仪、光源和采样附件的产品线和灵活易用的搭配,可以针对不同的吸光度试验搭配出N中选择。


吸光度测量的附件选择

如何为您的吸光度测量选择合适的采样附件?以下提供一些参考:

测量使用环境与地点?更精确地说,什么样的附件能满足您的现场和实验室,并且方便易用?如果测试样品能很简单地使用比色皿或者试管进行测量,那选择就可以扩展到比色皿支架(图1)或者其他支架类产品。如果需要进行实时的原位测量,或者流动液体的测量,可以选择透射形浸入式探头(不同光程可选)(图2)或者流动池(图3)等等。

QQ截图20220308092805.jpg

样品的性状:液体还是气体?由于气体的特性,我们要么选择高浓度样品,要么选择长光程容器进行测量。根据不同的样品,10cm光程的容器一般都足够了,比如CUV-UV-10(图4),或者使用准直透镜直接接触到样品中进行测试。

测试样品的光学密度如何?光学密度OD值直接影响您对测试样品不同光程容器的选择。光学密度越高,所需要的光程就越短。比如,SpecVette™作为高浓度样品的理想配件,它的光程可以短至250µm,另外还有1cm和10cm的标准配件可选。另外一方面,低OD的样品需要长光程配件,比如可以扩展到500cm的长光程流通池(图3)就是比较好的选择。如果您需要了解更多样品浓度与光程之间的关系信息,请参考比尔-朗博定律的具体介绍。

 

样品的体积如何?测量样品的体积也影响采样附件的选择。针对低于2uL的微量样品,可以选择微量比色皿(图5)和微量取样器(图6)


针对连续流动的样品怎么选择?形流动注射装置(图7),毛细管电泳池(图8),还包括那些可以使用泵装置/塑料套管连接的装置(图9)都是流动样品测量吸光度的选择。 

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吸光度测量采样附件选择一览表

类型

可选

最佳应用环境

比色皿

石英和塑料

实验室

比色皿支架

 

标准或者多用途;

恒温控制;

可与光谱仪集成 

实验室;

精确温控实验;

小体积,短光程采样

5 µl 比色皿;

250 µm短光程附件

核酸和蛋白质或者其他小体积样品分析;

光学密度较高的样品(比如墨水和染料)测试

流通池

 

Z形流通池取样分析;

小体积样品池;

微量液体的测试;

低浓度测试;

过程控制

浸入式探头

 

苛刻的实验环境;

高温、高压环境

实验室使用;

苛刻的化学或者物理环境

吸光度标准品

NIST可追溯标准品;

UV (200-450 nm) ;

可见 (400-900 nm)

质量控制;

对吸光度要求很高的应用环境

QQ截图20220308094022.jpg

Maya2000 Pro

适用于紫外吸光度测量的高分辨率光谱仪。使用#H7号光栅,波长检测范围200-300nm,5µm狭缝,CCD增加聚光棱镜以增加灵敏度

D-2000

氘灯 (~215-400nm)

CUV-UV-10

10cm光程比色皿和支架

CV-Q-100

圆柱形石英比色皿(带Teflon封口盖),体积28.2mL

QP455-025-XSR-BX

抗紫外老化光纤,芯径455µm,长度0.25m

OceanView

光谱仪操作软件

Flame-S-UV-VIS

模块化光谱仪,光谱范围覆盖200-850nm,狭缝25µm,消二级衍射滤光片

DH-2000-BAL

平衡氘灯和卤素灯光强的光源,波长范围215-2000nm

CUV-UV

1cm光程比色皿支架

CV-Q-10

10cm光程石英比色皿

QP450-2-XSR

抗紫外老化光纤,芯径450µm,长度2m

吸光度标准品

NIST可追溯标准品;


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